蛋白质组学

SILAC-蛋白质定量组学

SILAC即细胞培养条件下稳定同位素标记技术(Stable Isotope Labeling By Amino Acids In Cell Culture,SILAC),其实验原理是在细胞培养基中加入轻、中或重型稳定同位素标记的必需氨基酸(赖氨酸和精氨酸),通过细胞的正常代谢,使新合成的蛋白带上稳定同位素标签。等量混合各类型蛋白质,酶解后进行质谱分析。通过比较一级质谱图中同位素峰型的面积大小进行相对定量,同时二级谱图对肽段进行序列测定从而进行蛋白鉴定。

SILAC蛋白质定量组学技术流程

技术优点

活细胞水平标记技术,标记效果稳定,其标记效率不受裂解液的影响。标记效率较高。

样本需求量少,通常每个样品需要几十微克的蛋白量。

采用质谱定量,可同时鉴定并定量多种蛋白质。

多个样品混合后同时进行分离、酶切和鉴定,后续实验对样品的影响是一致的,减少了实验操作和仪器设备产生的影响,具有精密度和重现性。

标记采用的是体内标记技术,接近样品真实状态。

技术平台

Triple TOF 5600, Q-Exactive, Orbitrap Fusion™ Tribrid™

应用领域:

机理和调控机制研究

动态过程中机制研究

疾病标志物的筛选

用药及预后标志物筛选

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