蛋白质组学

货比三家,教你选对SDSPAGE预制胶设备

现在,SDS PAGE已成为蛋白实验不得不会的,不过,人家可不是随随便便就让你做出漂亮的结果哦,有时花几天,可能都得不到一张满意的图片,这是,小编建议你要试试预制胶了。本文为你介绍三个蛋白专家(Pierce、Invitrogen 、Bio-Rad)的预制胶产品,货比三家,才能有最佳选择哦。

蛋白专家Pierce公司推出了与多种电泳槽兼容的Precise Protein Gel预制胶。Precise Protein Gel是pH值中性的,蛋白不易降解,完整性好,而凝胶也稳定易保存,保质期可达12个月以上。同时,配合Tris-HEPES-SDS缓冲液,分辨率更高,且电泳速度更快,只需45分钟就可以完成电泳。最重要的是,Precise Protein Gel可以与多种电泳槽相兼容,包括实验室中最普遍的Bio- Rad Mini-PROTEAN 3、Invitrogen的Novex XCell II Surelock?和Hoefer等电泳槽,这样你就不用为了几盒胶而特地去买一个槽了,而且说明 书也很贴心,针对不同的电泳槽都有详细的步骤和图示。

目前有两种梯度浓度(8-16%、4-20%)和三种固定浓度(8%、10%、12%)可供选择,规格是最常用的10孔、12孔和15 孔。10孔的上样量达50ul,几乎是其他预制胶的两倍。蛋白分离 范围请看下表,大部分蛋白都可以得到很好分离,但是如果蛋白特别大或特别小,估计就不适用了。目录价是1526元(10块),有点小贵。

浓度 8% 10% 12% 8-16% 4-20%
分离范围(kDa) 205-45 205-24 205-14 205-14 205-6.5

Invitrogen早在2005年就开始大力推广NuPAGE预制胶,虽说当时的价格确实比较高,但也有不少用 户在试用了之后,觉得效果好又方便,还是忍痛买了。现在胶的价格降了2/3,也算是一个福音吧。NuPAGE胶专利的中性pH 和缓冲系统使凝胶 非常稳定(12个月的保质期),而且配合NuPAGE Antioxidant一起使用,使蛋白不易降解和氧化,提供了最佳的条带分辨率,减少了蛋白的修饰,改善了Western blot 的分析结果;电泳时间只需要35分钟,非常省时。很多用户使用后反映条带确实很sharp,比自己配胶可强多了。

NuPAGE胶分为两种:NuPAGE Bis-Tris Gel(适合中等大小或小蛋白,2.5-200 kDa)和NuPAGE Tris-Acetate Gel(尤其适用于大蛋白,30-400 kDa)。目前有五种浓度(10%、12%、4-12%、7%、3-8%)、两种厚度(1.0mm和1.5mm)以及不同孔数可供选择,总有一款合你心水。现在的促销价是每盒(10块)576元,比较实惠,不过就是与其他电泳槽不兼容,还要再花1980元买一个Novex XCell II Surelock?电泳槽。相关的缓冲液都有配方提供,可以选择自己配,除了NuPage Antioxidant,不过如果你的蛋白不易被氧化的话,也可以选择不加。

说起跑胶,怎么能忘了Bio-Rad呢?在实验室里放眼望去,几乎全是Bio-Rad的电泳槽。不过大部分用户都是自己配胶 ,可能还不知道Bio-Rad也有预制胶。Bio-Rad有多种规格、浓度和成分的预制胶,配合不同的电泳系统。平时实验室里最常用的是Mini- PROTEAN 3电泳槽,所以这里就介绍与之配套的Ready Gel预制胶。用于聚丙烯酰胺凝胶电泳的Ready Gel有两种:Tris-HCl Gel和Tris-Tricine Gel,Tris-HCl Gel主要用于SDS-PAGE和非变性的Native PAGE;Tris-Tricine Gel则用于分离肽段。

因为是碱性环境(pH 8.8),胶易降解,所以只能保存12周(除去订货和路上的时间,到手估计只有4周了)。有多种浓度和孔数供选择,蛋白分离范围请看下表。Ready Gel可以分离小至1 kDa的蛋白,不过对于250 kDa以上的蛋白,就无能为力了。它是一块一块单独售卖的,每块的价格在130左右,偏贵,不过偶尔买一块来跑个漂亮的电泳图,用来发paper,还是可以接受的。

Tris-HCl Gel 分离范围 (kDa) Tris-HCl Gradient Gels 分离范围 (kDa) Tris-Tricine Gel 分离范围 (kDa)
5% 100-250 4-15% 20-250 16.5% 4-30
7.5% 40-200 4-20% 10-200 10-20% 1-40
10% 30-150 8-16% 6-70
12% 20-120 10-20% 10-100
15% 10-100
18% 6-50

综上所述,我们分析了三家公司的预制胶产品,三者各有优势:Precise 公司的产品兼容性强,Invitrogen电泳最省时,33分钟内搞定,Bio-Rad呢,虽然价格贵,用来发论文却是可圈可点的,大家根据自身的需求选择吧

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