蛋白质组学

豆粕中尿素酶活性的测定

一、实验目的

掌握测定尿素酶活性的各种方法的基本原理及方法步骤。

二、实验原理

将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合,在30℃保持30min后,尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。用过量的盐酸溶液中和所产生的氨,再用氢氧化标准溶液回滴。

三、实验设备

1、样品筛:孔径200μm;

2、酸度计:精度0.02pH,附有磁力搅拌器和滴定装置;

3、恒温水浴:可控温30±0.5℃;

4、试管:直径18mm,长1 50mm,有磨口塞子;

5、精密计时器;

6、粉碎机:粉碎时应不生强热(如球磨机

7、分析天平.感量0.1mg;

8、移液管;10mL。

四、实验内容

1、称取约0.2g已粉碎的试样,称准至0.1mg,转入试管中,(如活性很高的样品,可只称0.05g试样),移入10ml尿素缓冲溶液,立即盖好试管并剧烈摇动,马上置于30±0.5℃恒温水浴中,准确计时保持30min。即刻移人10m1盐酸溶液,迅速冷却到20℃。

2、将试管内容物全部转入烧杯,用5ml水冲洗试管两次,立即用氢氧化钠标准溶液滴定到pH4.70 。

3、另取试管作空白试验,移人10ml尿素缓冲液,10ml盐酸溶液。称取与上述试样量相当的试样,也称准至0.1mg,迅速加入此试管中。立即盖好试管并剧烈摇动,将试管置于30±0.5℃的恒温水浴,同样准确保持20min,冷却至20℃,将试管内容物全部转入烧杯,用5mL水冲洗试管两次,并用氢氧化钠标准溶液滴定至pH 4.70。

4、以每分钟每克大豆制品释放氨的mg量来表示尿素酶的活性(UA),可按下式计算:

由一个分析人员用相同方法,同时或连续两次测定结果之间的相差,应不超过平均值的10%,以其算术平均值报告结果。

(0)

热评文章

发表评论