蛋白质组学

蛋白质盐析分离法

蛋白质的结构与功能作用 蛋白纯化技术专题

一、蛋白质 盐析分离的原理:

蛋白质在稀盐溶液中溶解度会随着盐浓度的增大而上升(盐溶),当盐浓度增大到一定数值时,其溶解度又逐渐下降直至蛋白质析出。盐析的发生是由于盐浓度增大到一定数值时使水活性降低,导致蛋白质分子 表面电荷逐渐被中和,水化膜逐渐被破坏,引起蛋白质分子之间相互聚集并从溶液中析出,最后经离心机 分离后获得沉淀物和上清液。

二、影响蛋白 质盐析分离的因素:

1、蛋白质浓度 :

蛋白质浓度过大,盐析时发生共沉现象,分离效果不好。蛋白质浓度太稀,耗盐量过大,蛋白质回收率低。一般蛋白质浓度在2.5%~3.0%较适中。

2、离子强度:

离子强度越大,蛋白质的溶解度越低,越容易产生盐析现象。

3、离子类型:

离子半径小而价数高的离子,对盐析影响较强。离子半径大而价数低的离子,对盐析影响较弱。

4、PH值:

蛋白质所带净电荷越多,溶解度越大。净电荷为零时,溶解度最低。一般将PH值调到蛋白质等电点附近,这样有利于盐析。

5、温度:

低离子强度或水中,在一定范围内蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大。高盐溶液中,蛋白质的溶解度随着温度的升高有时反而下降。一般情况下在0~4℃操作。

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