蛋白质组学

酪蛋白的提取

 

一、实验目的
1、掌握一种提取蛋白的方法。
2、掌握一种检测牛乳质量的方法。

二、 实验原理
酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质,约占乳蛋白的80~82%,酪蛋白不是单一的蛋白质,是一类含磷的复合蛋白质混合物,以一磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相结合。它还含有胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸,但不含半胱氨酸。它在牛乳中的含量约为35g/L,比较稳定,利用这一性质,可以检测牛乳中是否掺假。
酪蛋白在其等电点时由于静电荷为零,同种电荷间的排斥作用消失,溶解度很低,利用这一性质,经牛乳调到pH4.6,酪蛋白就从牛乳中分离出来。酪蛋白不溶于乙醇,这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中将脂类杂质除去。

三、 仪器和试剂
仪器
温度计、布氏漏斗、pH 试纸、抽滤瓶、电炉、烧杯、量筒、表面皿、天平等。
试剂
1. 95%乙醇、乙醚
2. pH4.6乙酸钠缓冲液0.2mol/L
3. 乙醇、乙醚混合液:乙醇∶乙醚=1∶1(体积比)
4. 市售牛乳

四、 实验步骤
1.酪蛋白等电点沉淀
将100mL 牛乳放到500mL 烧杯中,加热至40℃左右的乙酸钠缓冲液,直到pH 达4.6左右,用pH试纸或酸度计调试。将上述悬浮液冷却至室温,然后放置5min,用细布过滤,收集沉淀。
2.除脂类杂质
将上述沉淀用少量水洗数次,然后悬浮于30mL95%的乙醇中。将此悬浮液倾于布氏漏斗中,抽滤除去乙醇溶液,再倒入乙醇—乙醚混合液洗涤沉淀两次,最后再用一米洗涤沉淀两次,抽干。将沉淀从布氏漏斗中移去,在表面皿上摊开以除去乙醚,干燥后得到的是酪蛋白纯品。准确称重后,计算出每100mL 牛乳所制备出的酪蛋白数量(g%),并与理论产量(3.5g%)相比较,求出实际获得百分率。

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