蛋白质组学

斐林试剂测定还原糖

 

一、原理:还原糖可以将斐林试剂中德二价铜离子还原为一价铜。反应终点可由次甲基蓝指示,根据一定量德斐林试剂完全还原所需的还原糖量,可计算所加入样品中还原糖的含量。

二、试剂与材料

1、斐林试剂:甲液:称取69.3g硫酸铜(CuSO4 5H2O)用蒸馏水溶解,定容至1000ml。

乙液:称取346g酒石酸钾钠,100g氢氧化钠,用蒸馏水溶解,定容至1000ml。

2、1%次甲基蓝溶液:称取1g次甲基蓝溶解于100ml蒸馏水中,于棕色瓶中储存。

3、标准葡萄糖液:准确称取2g无水葡萄糖(预先于105℃烘2小时左右至恒重),加水溶解,定容至1000ml。此为0.2%的标准葡萄糖液。

碱式滴定管、电炉、样品糖液

三、操作方法

1、斐林试剂的标定:吸取斐林试剂甲、乙液各5ml,置于250ml三角瓶中,加入10ml蒸馏水,并从滴定管中加入0.2%标准葡萄糖液若干毫升,其量应控制在后滴定时(消耗0.2%的标准葡萄糖0.5-1.0ml)。摇匀,于电炉上加热至沸,并保持微沸2min,加2滴1%次甲基蓝溶液,继续用0.2%标准的葡萄糖溶液滴定至蓝色消失为终点。此滴定操作在1min内完成,记录耗用的0.2%标准葡萄糖溶液体积为V0毫升。

2、定糖预备试验:吸取斐林甲、乙液各5ml,置于250ml三角瓶中,准确加入10ml样品糖液,摇匀于电炉上加热至沸。加2滴1%次甲基蓝溶液,用0.2%标准葡萄糖液滴定至蓝色消失。消耗标准葡萄糖液V1毫升。

3、样品中还原糖的测定:准确吸取斐林甲、乙液各5ml,置于 250ml三角瓶中,准确加入10ml样品糖液,补加(V0-V1)毫升蒸馏水,并从滴定管中预先加入(V1-1)毫升0.2%标准葡萄糖液。摇匀,于电炉上加热至沸,保持微沸2min,加入2滴1%次甲基蓝溶液,继续用0.2%标准葡萄糖滴定至蓝色消失。此操作在1min内完成。记录消耗标准葡萄糖液总体积为V毫升。

四、计算

还原糖含量(g/ml,以葡萄糖计)=(V0-V)×0.2×0.1×n

式中:V0-斐林试剂标定值;V-样品糖液测定值;0.2-标准葡萄糖液浓度;10-样品糖液体积;n-样品稀释倍数

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