蛋白质组学

SDSPAGE胶染色

一、各种蛋白染色方法的灵敏度比较

染色方法灵敏度与质谱的兼容性Silver1- 10ng-Silver (MS compatible)10ng+Comassie G -250 or R-250>30ng+Antibody(western blot )1ng-

二、考马斯亮蓝染色

CBB 染色液:0.5%考马斯亮蓝 G250 或 R250;40%甲醇;10%乙酸;将 CBB 溶于甲醇中并不停的搅拌 15min。

加入乙酸与 ddH2O 脱色液:30%甲醇;10%乙酸

染色方法:1. 在摇床上染色 30min;2. 脱色至蛋白点或条带清晰可见;3. ddH2O 洗 3-5 次。

三、胶体考马氏亮蓝染色 ColloidalCoomassie Staining(Cambridgecentrefor porteomics)

sensitivity = ~100ng

1. 固定:甲醇/ 醋酸/H2O(45:1:54)至少 20min.

2. 染色 12-18hr。

染色液: 17% (w/v) 硫酸铵;34%甲醇;0.5%醋酸;0.1% (w/v) CoomassieG250。

3. 脱色:用 H2O 脱色至蛋白点和背景清晰.

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