蛋白质组学

BSA使用技巧讨论

它们都是BSA 生物实验中的封闭剂

1、BSA 牛血清白蛋白在PCR中的作用是什么?它的作用机理是什么?

BSA will coat the tube walls, preventing the template from being absorbed. This will reduce the frequency of primer dimers that occurs when the template concentration is low. BSA is also used to reduce the inhibition caused by humic acid contaminants.

2、Elisa中的blocking buffer 、tween、BSA等问题

请问tween是降低非特异性binding的吗? 如果blockingbuffer中加入了0.05%的tween,会不会把之前coating上的蛋白也给洗掉了?

一抗和二抗的稀释液有什么要求? 里面的BSA浓度过高(比如3%)会不会影响特异性识别?

Tween-20有复性抗原 的作用,可提高特异性的识别能力。在做westen blot时,用惰性蛋白质或非离子去污剂封闭膜上的未结合位点可以降低抗体的非特异性结合。封闭剂应该封闭所有未结合位点而不替换膜上的靶蛋白、不结合靶蛋白的标委、也不与抗体或检测试剂有交叉反应。最常见的封闭剂是BSA、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶和Tween-20(0.05 - 0.1%)稀溶液。

一抗的稀释看你试验的要求了。二抗你说的是酶标抗体吧,这个要稀释到工作浓度,后面的显色效果才是最佳的!

BSA主要是封闭液中用到,其实作用显而易见是起到封闭效果,就是结合包被过程中未结合的结合位点,提高ELISA中的特异性结合,提高实验的精确度。一般浓度是1%-2%

3、牛血清白蛋白BSA的等电点是多少

天然牛血清白蛋白(BSA)的等电点为4.6~5.8,经无水乙二胺(EDA)和碳化二亚胺(EDC)反应,改性后的BSA等电点为8.6。

4、牛血清蛋白 (BSA),牛血清蛋白(第五组分)之间有什么区别?

“第五组分” 是 牛血清蛋白的一个级别。

牛血清蛋白等级 从低到高 :

牛血清白蛋白,

牛血清白蛋白第五组分,

牛血清白蛋白(无必须脂肪酸),

牛血清白蛋白(无蛋白酶),

牛血清白蛋白(细胞培养级),

金标级牛血清白蛋白,

交联牛血清白蛋白

就是说 越往后的 蛋白 品质越高,当然价钱也越贵。

你说的牛血清蛋白(BSA)中的BSA 就是“牛血清蛋白”的英文缩写简称。 BSA 不是一种型号。

5、BSA的变性温度

牛血清白蛋白的话,大概是60~72℃.

6、WB转膜后清晰看到Marker在膜上,再用5%的BSA封闭,一抗过夜,二抗室温一个小时,显影定影后胶片一片空白?

以前也出现过这种情况,问题不清楚,因为这里的太多可能出错的地方了

1)就像你说的抗体浓度问题,不过我觉得这里问题不是太大

2)你检测的东西的浓度问题,如果表达很低的话,曝光时间久要长了,但是你显影之后一点都没有的话,就有问题了。

3)ecl反应液有没问题?

4)曝光的时候的那张膜与胶片之间有没压紧?

做WB的时候最好是有正负对照,现在的有曝光的Marker,你可以买点试试~

7、小牛血清和BSA的区别?

小牛血清是CSA 胎牛血清是BSA 者因胎牛未与母体外环境接触,二者中促生长因子,粘附因子及激素含量不一,后者使用效果更好些且贵很多。我养用BSA的细胞生长速度比用CSA快5倍以上

8、本人是做胶体金试剂的,现在发现一个较怪的现象。我现在做产品是用于全血检测的,需配稀释液。现在的现象是,检测稀释液时,条是没有假阳的。但加入阳性标准品时,再用稀释液冲,结果显带很深。与真实的结果有很大的区别。我的稀释液是PB+BSA,后来去掉BSA后,显带很浅。这是为什么呢?BSA怎的会出现假象呢?希望大家讨论指点。

呵呵,你是万浮的吧!估计你用了多抗吧,可能这多抗质量不怎么的,做多抗时疫苗不纯,有BSA成分,导致分离出的抗体里有抗BSA抗体或类似能与BSA成分发生交叉反应的抗体。换个抗体试试。我们刚好也做原料,这情况以前碰到过。

1.BSA不纯,含杂质;

2.T line包被抗体和金标抗体对BSA的亲和性强。

3.样品稀释液里的盐离子或pH的影响造成了BSA与包被抗体和金标抗体亲和性强。

8、本人前日在查阅ELISA相关试剂配制时发现,一般封闭用BSA浓度为0.5%或1%,这是常用剂量,可是具体配制时却发现:《生物化学仪器分析与实验技术》一书:封闭液(含1%BSA):10mlPBS中加100mgBSA。《实用分子生物学操作指南》:BSA0.1g加洗涤液至100ml。如此浓度我已经糊涂了,请高手指点。

做流式细胞仪的BSA浓度为0.5-1%;ELISA等用2-4%。 1%BSA应该是100ml溶液里面含有1克的BSA.所以10mlPBS中加100mgBSA是对的. 

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