蛋白质组学

维生素C的定量测定

 

一、原理:维生素C具有化学还原性。2,6-二氯酚靛酚钠盐水溶液呈蓝色,在酸性环境中为玫瑰色,当其被还原时,则脱色。根据其各自性质,利用2,6,-二氯酚靛酚在酸性环境中滴定有维生素C的样品溶液。开始时,样品液中的维生素C立即将滴入的2,6-二氯酚靛酚还原脱色,当样品液中维生素全部被氧化时,再滴入2,6-二氯酚靛酚就不再被还原脱色而呈玫瑰色。故当样品液用2,6-二氯酚靛酚标准液滴定时,溶液出现浅玫瑰色时表明样品液中的维生素C全部被氧化,达到滴定终点。此时,记录滴定所消耗的2,6-二氯酚靛酚标准量,按下述计算出样品中还原型维生素C的含量。

二、材料与试剂

绿豆芽、10%盐酸溶液

2,6-二氯酚靛酚溶液:称取0.21g碳酸氢钠,0.26g2,6-二氯酚靛酚溶于250ml蒸馏水中,稀释至1000ml。过滤,装入棕色瓶内,置于冰箱中保存,不得超过3天。使用前用新配制的标准抗坏血酸溶液标定。取5ml标准抗坏血酸加入5ml偏磷酸-醋酸溶液。然后用2,6-二氯酚靛酚溶液的浓度,以每ml2,6-二氯酚靛酚溶液的浓度,以每毫升2,6-二氯酚靛酚溶液相当于抗坏血酸的mg数来表示。

标准抗坏血酸溶液:准确称取纯抗坏血酸结晶50mg溶于偏磷酸-醋酸溶液定容到250ml。装入棕色瓶中,储于冰箱内。

偏磷酸-醋酸溶液:称取偏磷酸15g,溶于40ml冰醋酸和450ml蒸馏水所配的混合液中。过滤。储于冰箱内,此液保存不得超过10天。

三、操作方法

1、制备含维生素C的样品提取液:称取30g绿豆芽置于研钵中研磨,放置片刻(约10分钟),用2层纱布过滤,将滤液(如混浊可离心)滤入50ml容量瓶中。反复抽提2-3次,将滤液并入同一容量瓶中。最后,用酸化的蒸馏水(每10ml蒸馏水加10%盐酸1滴)定容,混匀,备用。

2、维生素C含量的测定:量取样品提取液10ml于锥形瓶中。用微量滴定管,以2,6-二氯酚靛酚溶液滴定样品提取液,呈微弱的玫瑰色,持续5秒钟不褪为终点,记录所用2,6-二氯酚靛酚的ml数。整个滴定过程不要超过2分钟。另取10ml用10%盐酸酸化的蒸馏水做空白对照滴定。样品提取液和空白各做三份。

3、计算结果

维生素Cmg/100g样品=((VA-VB)×S)/W×100

VA为滴定样品提取液所用的2,6-二氯酚靛酚的平均ml数

VB为滴定空白对照所用的2,6-二氯酚靛酚的平均ml数

S为1ml2,6-二氯酚靛酚溶液相当于维生素C的mg数

W为10ml样品提取液中含样品的g数

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