蛋白质组学

蛋白的裂解与提取方法步骤

 

这是偶整理的蛋白裂解和提取的protocol,希望对大家有所帮助。

10ml 三去污裂解液配方如下:

50 mmol/L Tris-cl (pH 8.0): 0.07882g

150 mmol/L NaCl: 0.08775g

0.2 g/L叠氮钠: 0.002g

1 g/LSDS 0.01g

100 mg/L Aprotin 0.001g

10 g/L NP-40 0.1g

5 g/L去氧胆酸钠 0.05g

100 mg/L 苯甲基磺酰氟(PMSF) 0.001g

总蛋白抽提程序:

1.PBS 洗细胞3 次

2.加入裂解缓冲液(1.5x106个细胞大约加入100µL 裂解液,或100ml细胞瓶中加入100µL 裂解液),

冰上放置20min

3.收集裂解液

4.离心,12000转,2~10min

5.吸取上清,蛋白定量 ,分装,保存在-80度备用

(0)

热评文章

发表评论