蛋白质组学

免疫球蛋白提取技术:IgE的分离与提纯

 

(一)材料与试剂

1.血清
2.饱和硫酸铵溶液
3.洗脱液0.005Mol/L pH7.4PB液
0.025 Mol/L pH7.4PB液
0.01Mol/L pH7.4PBS 液(0.14mol/L NaCl)
4.DE52
5.SephadexG150

(二)操作方法

1.取血清倍比稀释后,加等量饱和(NH4)2SO4溶液,盐析。
2.离心取沉淀,溶于少量生理盐水中,透析、除盐。
3.过DE52柱,以0.005Mol/L pH7.4PB液洗脱,收集洗脱蛋白峰(IgG),弃去。
4.换以0.025Mol/L pH7.4 PB液洗脱,洗下的蛋白峰主要是IgE。
5.透析除盐。
6.过G150柱,以0.01Mol/L pH7.4PBS(0.14Mol/L NaCl)洗脱,收集洗脱液即为纯化的IgE。
7. 浓缩、鉴定。

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