蛋白质组学

植物组织蛋白质提取方法

 

1、植物 组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜,样品制备完成。蛋白质提取液:300ml1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml2、甘油(Glycerol)75ml3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g这种方法针对SDS-Page ,垂直板电泳! 2 、植物组织蛋白质提取方法 三氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时),然后真空干燥沉淀,备用。4、上样前加入裂解液,室温放置30分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准),可临时保存在4℃待用。5、用Brandford法定量蛋白,然后可分装放入-80℃备用。药品:提取液:含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水 中(终体积为5ml),使用前再加入1M的DTT65ul/ml。这种方法针对双向电泳,杂质少,离子浓度小的特点!当然单向电泳也同样适用,只是电泳的条带会减少! 3组织:肠黏膜 目的:WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤:含蛋白质上清液中加入异丙醇:(1.5ml每1mlTRIPURE用量)倒转混匀,置室温10min离心:12000 g,10min,4度,弃上清加入0.3M盐酸胍/95%乙醇:(2ml每1mlTRIPURE用量)振荡,置室温20min离心: 7500g,5 min,4度,弃上清重复0.3M盐酸胍/95%乙醇步2次沉淀中加入100%乙醇 2ml

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