蛋白质组学

免疫球蛋白提取技术:IgA的分离与提纯

 

(一)材料与试剂配制

1.DEAE52纤维素
2.0.10Mol/L ZnSO4液
ZnSO4·7H2O 2.88g
加水至1 000.00ml
3.饱和硫酸铵溶液
4.10%EDTA —Na
5.SephadexG200
6.0.01Mol/L pH7.4PB液
7.0.10Mol/L pH6.4PB液
8.血清

(二)操作方法

1.取血清加等量的0.1Mol/L ZnSO4液,调pH至7.0,室温搅拌1h,离心去沉淀。
2.于上清液中加入等量的饱和硫酸铵溶液,混匀后静置30min或冰箱过夜。
3.10 000r/min离心10min,去上清。
4.取沉淀溶于4ml10%EDTA-Na溶液中。
5.生理盐水中透析除盐。
6.过DE52柱,用0.01Mol/L pH7.4PB液洗脱蛋白(IgG)弃去。
7.换用0.1Mol/L pH6.4PB液洗脱,收集蛋白峰,即为IgA。
8.再过SephadexG200柱,洗液为0.01Mol/L pH7.4PBS (0.14Mol/L NaCl),收集洗脱液测OD280值,取第一峰即为纯化IgA。
9.透析、浓缩、鉴定。

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