蛋白质组学

考马斯亮蓝法测蛋白含量:药品的配制

Bradford法检测蛋白浓度专题

一、药品的配制步骤

(一)、实验准备:

1、 准备所需的药品和玻璃仪器。

2、 洗涤。(怎样洗涤算干净?)

(二)、计算:

1、百分比浓度计算:

1)、G/V比

例如配1% NaCl,称1g NaCl溶于100ml 水。

2)、V/V比:

例如配75%乙醇100ml,75%×100%=100%×X, X=75ml。取75ml无水乙醇,加25ml蒸馏水。

乙醇:乙醚:丙酮=2:1:2配500ml,各取200 ml,100 ml,200 ml混合。

3)G/V比:用的较少,如计算灰分中某种元素如Fe的含量。

2、摩尔浓度计算:注:药品的分子 量一般在标签中注明。

1)、0.1M或0.1mol/L NaCl配100ml。

M=质量/体积(L)称取NaCl0.1×0.1×40=0.4g 摩尔数=G(g)/摩尔质量

2)、0.1mMNaCl配100ml

mM=毫摩尔数/体积(L) 称取NaCl0.1×0.1×40=0.4g

毫摩尔数=G(mg)/摩尔质量

3)、0.1uNaCl配100ml

mM=微摩尔数/体积(L) 称取NaCl0.1×0.1×40=0.4mg

微摩尔数=G(ug)/摩尔质量 称取NaCl0.1×0.1×40=0.4ug

3、 混合溶液配制的计算:

如配3uMEDTA ,2.25mM NBT以及60uM 溶液100ml,用50mM磷酸缓冲液配制。

注意:1、分别标定体积计算

2、分别配制再混合,但总体积不能 为100ml

(三)、标量:

1、根据需要选择不同量程的天平根据要求去不同精度的测量器,如量筒或移液管。

2、电子分析天平的使用。

(四)、溶解:

1、根据药品配置要求选择溶剂。蒸馏水,双蒸水,无离子水等。

2、只能用烧杯溶解。注意加入溶剂只能加入总体积的2/3左右,剩余溶剂洗涤烧杯三次左右,直到洗涤干净。

小常识:药品标签中一般标识有药品的溶解性能和分子式,可根据分子式和所学的常识判断药品的结构和性质特点(包括溶解性质)。

如酸碱两性物质的配制(AA、蛋白质、核苷酸 等)如果溶解性能不好可以用稀酸或稀碱促进溶解,但pH应在被要求的范围内。

3、加热促进溶解,但注意应在配制的范围内有的药品还需水溶加热较好。如:配0.1%的淀粉,水裕加热(温度在80-90。C),过量会糊化。

(五)、定容:

1、用容量瓶定容;

2、用玻璃棒引流或用小漏斗;

3、用溶剂加入到接近刻度,然后用滴管加入到刻度。要求刻度与液体凹面相切为止(眼睛可视);

4、上下窑洞容量瓶几次,混合均匀即可。(注意不再定容了,防止溶液漏掉。)

(六)、装入试剂瓶,贴上标签。

标签应注明以下内容:药品浓度、名称、配制人、配制日期等。

(七)、清理实验场所。

二、磷酸缓冲液的配制。

(一)、配制0.2mol/L即0.2M pH=6.8的磷酸缓冲液。用磷酸氢二钠—磷酸二氢钠做缓冲液。

选用药品:Na2HPO4·12H2O(碱)和NaH2PO4·12H2O(酸)配缓冲液100ml。书中说明。

(二)、计算 :

1、注:书中有注明配置的量。

2、计算:Na2HPO4·12H2O称取71.64×0.1=7.164g

NaH2PO4·12H2O称取 31.21×0.1=3.121g

3、含有不同结晶水的换算。

书中配1/15mol/L的缓冲液配1L,书中用Na2HPO4·2H2O需要11.87g/L但用Na2HPO4·12H2O需多少g?

11.87=(178/358)×X,X=23.87g。

(三)、分别配制缓冲液各100ml(根据需要确定配制的量)。

即:0.2M Na2HPO4·2H2O和NaH2PO4·2H2O100ml。

(四)、按书中的量配制取量再混合。

如:pH=6.8,分别去缓冲对49ml和51ml。

(五)、用pH试纸ceni索赔的缓冲液的pH值,检测配置是否准确。

(六)如配50mM pH =6.8的缓冲液100ml ,以你配制的母液稀释即可。

计算:50×0.1=0.2×1000×X (L);X =0.025L;

取0.2M pH=7.2的缓冲液25ml,用蒸馏水定容至100ml即可。

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