蛋白质组学

His.Tag序列蛋白纯化法宝之HIS*BIND的选择

蛋白纯化技术专题

各种His.Bind基质的产品如何选择:本文介绍带Ni NTA琼脂 糖、无Ni IDA琼 脂糖、带Ni的IDA琼脂糖预装柱、无Ni IDA触须甲酰化、带Ni的IDA纤维素预装筒、带Ni的IDA磁性琼脂糖……等His.Bind基质的特点和应用。

His.Bind基质选择指南:与任何纯化介质一样,His.Bind树脂在接近结合载量时使用,可获得最干净的分离效果

产品 类型 载量 特点 应用
Ni-NTA His.Bind 树脂 Ni NTA琼脂 5-10 mg/ml

最小的Ni2+ 浸出20mM&NBS p; b -ME相容

小到中量,重力流柱推荐用于真核抽提物
Ni-NTA His.Bind&NBS p; Superflow Ni NTA琼脂 5-10 mg/ml 最小的Ni2+ 浸出20mM  b -ME相容 高流速和压力 小量到生产级FPLC或重力流柱 推荐用于真核抽提物
His.Bind树脂 Ni IDA琼 脂糖 8 mg/ml 可重复使用多次与His.Bind缓冲试 剂盒兼容 小到中量重力流柱或批次模式
His.Bind柱(Cloumn) Ni的IDA琼脂糖预装柱 10 mg/次 预装柱与His.Bind Quick缓冲试剂盒兼容 方便的纯化重力流柱
His .Bind Fractogel(S) Ni IDA触须 甲酰化 >10 mg/ml 20-40 m M颗粒大小 高流速和压力 小量到生产级FPLC或重力流柱 高分辨率分离
His.Bind Fractogel(M) Ni IDA触须 甲酰化 >10 mg/ml 40-90 m M颗粒大 高流速和压力 小量到生产级FPLC或重力流柱
His.Bind Quick 300筒( Ca rtridge) Ni的IDA纤维素预装筒 0.5 mg/次 每端锁紧接口与His.Bind Quick缓冲试剂盒配合使 用 注射器操作真空多支管操作快速纯化
His.Bind Quick 900 筒(Cartridge) Ni的IDA纤维素预装筒   2 mg/次 每端锁紧接口 
His.Bind Quick缓冲试剂盒配合使用

注射器操作
真空多支管操作
快速纯化  

His.Bind Quick 柱(Cloumn)   Ni的IDA纤维素预装柱   5 mg/次   每端锁紧接口与His.Bind Quick缓冲试剂盒配合使用 真空多支管操作快速纯化多个样品

His.Bind 磁化琼脂糖珠  

Ni的IDA磁性琼脂糖 5 mg/ml   3 m 磁性琼脂糖珠   快速小量纯化磁性分离适合高通量操作

His.Bind柱

His.Bind柱预装了1.25ml柱床体积的Ni2+结合His.Bind树脂。顶部和底部的玻璃纤维确保上样和走柱时缓冲液均匀流动和最小干扰。使用BugBuster和Benzonase?核酸酶制备细菌裂解物可获得较好效果。

His.Bind和His.Bind快速缓冲液试剂盒

His.Bind缓冲液试剂盒是一套经过测试和优化的缓冲液,用于IDA His.Bind树脂一步法纯化蛋白。包括的溶液可用于10根2.5ml柱的Ni2+结合、洗涤和洗脱。除了8X Ni2+结合缓冲液(树脂以Ni2+结合形式提供),His.Bind快速缓冲液试剂盒与His.Bind缓冲液试剂盒成分完全一样。

Ni-NTA缓冲液试剂盒

Ni-NTA缓冲液试剂盒提供的一套缓冲液优化用于在Ni-NTA His.Bind树脂上纯化His.Tag融合蛋白。这些磷酸缓冲液与His.Bind缓冲液试剂盒中的Tris溶液不同。用户可以参考操作指南,使用4X浓缩液进行结合、洗涤和洗脱操作。

BugBusterTM Ni-NTA His.Bind和His.Bind纯化试剂盒

BugBuster蛋白抽提试剂是从大肠杆菌有效抽提可溶性蛋白的即用型溶液(不需要机械破碎细菌)。BugBuster Ni-NTA His.Bind和His.Bind纯化试剂盒带有BugBuster试剂(方便制备可溶性细胞抽提物)以及His.Tag融合蛋白亲和纯化的相应树脂。两个试剂盒都包括Benzonase核酸酶,用于降低粘度并从蛋白制备物中去除核酸。BugBuster His.Bind纯化试剂盒还包括层析缓冲液。

His.Tag/His.Bind技术可用于纯化His.Tag序列中的组氨酸与固定化金属离子(通常为Ni2+)。最常用的金属螯合物包括NTA和IDA,在实际应用中,这两种螯合物各有利弊,因此要优化条件,尽量减少非特异结合蛋白的共纯化才能达到最佳实验结果。

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