蛋白质组学

真核生物高分子量DNA制备方法

 

实验原理 :利用液氮对植物组织进行研磨,从而破碎细胞。细胞提取液中含有的SDS溶解膜蛋白而破坏细胞膜 ,使蛋白质变性而沉淀下来。EDTA抑制DNA酶的活性。再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白,得到的DNA溶液经乙醇沉淀。

实验材料:新鲜植物 叶片

实验步骤:1.取4g新鲜叶片,在液氮中研磨成粉末状(越细越好)。 2.转移至50ml离心管中,加入16ml TENbf,充分混匀。65℃水浴保温20min。 3.从水浴中取出离心管,加入5ml 5 mol/L KCl溶液,混匀,水浴20min。 4.4000r/min 离心 20 min。 5.将上清液转移到另一50ml离心管中。 6.加等体积酚/氯仿混匀,12000r/min 离心5min,取上清。 7.加等体积氯仿,混匀,12000r/min 离心5min,取上清。 8.加入0.6-1倍体积的异丙醇(沉淀DNA),混匀。放置时间 9.离心获得沉淀,70%乙醇洗3次。风干沉淀。

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