蛋白质组学

免疫球蛋白提取技术:分泌型IgA的分离与鉴定

 

(一)材料与试剂

1.初乳
2.SephadexG200
3.0.10Mol/L pH6.8PB液
4.0.01Mol/L pH7.4PB液
5.DEAE52

(二)操作方法

1.取初乳20ml,10 000rpm离心10min,弃去表面脂肪层及底部的沉淀物。
2.取乳清过SephadexG200柱(柱规格为2.50cm×90cm),以0.10Mol/L pH6.8PB液洗脱,第一峰为IgA(含IgG)。
3. 收集乳液,于0.01Mol/L pH7.4PB液中透析。
4. 将透析液浓缩至5mg/ml以上。
5. 过DE52层析柱 ,用0.01Mol/L pH7.4PB液洗脱,洗下蛋白峰为IgG,弃去。
6. 换用0.10Mol/L pH6.8PB液或0.01Mol/L pH7.4PBS (0.10Mol/L NaCl)液洗脱,
收集洗脱液 ,即为较纯的IgA液。
7. 必要时,可再过一次SephadexG200柱。
8. 浓缩,鉴定

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