蛋白质组学

盐析法纯化免疫球蛋白

 

(一) 原理
  蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度,以及蛋白质分子 带有电荷的情况决定的。当用中性盐加入蛋白质溶液,中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质,于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时,中性盐加入蛋白质溶液后,由于离子强度发生改变,蛋白质表面电荷大量被中和,更加导致蛋白溶解度降低,使蛋白质分子之间聚集而沉淀。
  (二) 主要材料
  1. 试剂:
  (1) 正常人混合血清;灭菌生理盐水。
  (2) 饱和硫酸铵溶液的配制:
  称(NH4)2SO4(AR)400~425克,以50~80℃之蒸馏水500ml溶解,搅拌20分钟,趁热过滤。冷却后以浓氨水(15N NH4OH)调PH至7.4。配制好的饱和硫酸铵,瓶底应有结晶析出。
  (3) 萘氏试剂配制:
  称HgI11.5克,KI8克,加蒸馏水至50ml,搅拌溶解后,再加入20%NaOH 50ml。
  (4) 0.02M, PH7.4磷酸盐缓冲盐液(Phosphate Buffered Saline PBS )配制:
  贮存液:
  A液:0.2M Na2HPO4:Na2HPO4·12H2O 71.64克,加蒸馏水至1000ml;
  B液: 0.2M NaH2P4:NaH2P4·2H2O 3.12克,加蒸馏水至1000ml;
  应用液:取A液81ml加B液19ml混合,再以生理盐水作10倍稀释即成。
  (5) 0.1M, PH7.4磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffer PB)配制:
  将上述A液取81ml与B液19ml混合,再以蒸馏水对倍稀释即成。
  (6) 20%磺基水杨酸。
  2. 器材:
  普通冰箱、离心机、电磁搅拌器,751桮型紫外分光光度计 、扭力天平,粗天平。
  透析袋、尼龙绳、细竹棒、精密PH试纸(PH5.5~9.0)、眼科镊子、小剪刀。
  烧杯、量筒、吸管、滴管、灭菌小瓶、试管等。
  (三) 盐析的操作步骤
   取正常人混合血清加等量生理盐水,于搅拌下逐滴加入与
   稀释血清等量的饱和硫酸铵

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