蛋白质组学

SILAC定量

SILAC定量(Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)技术是利用哺乳动物细胞增殖对必需氨基酸的依赖性原理而设计的代谢标记蛋白的方法。SILAC技术应用于蛋白质组研究,为全面、系统地定性和定量分析复杂哺乳动物细胞蛋白质提供了有效的方案。

 

  分别用天然同位素(轻质)或稳定同位素(重质)标记必需氨基酸取代细胞培养基中相应氨基酸,细胞进过6-7个倍增周期后稳定同位素标记的氨基酸完全渗入到细胞新和成的蛋白质中,不同标记细胞的裂解蛋白按细胞数或蛋白量等比例混合、经过分离、纯化后进行质谱鉴定。

 

 

蛋白质

 

SILAC定量技术流程图

 

 

  实验流程

 

蛋白质

 

  技术特点

  多个样本混合后同时进行分离、酶切和鉴定,后续实验对样品的影响是一致的,减少了实验操作和仪器设备引入的定量误差。

  标记不受裂解液成分影响,效果稳定。

  活体标记,更接近样品真实状态。

  可在多种培养基中的多种细胞进行标记。

 

  应用领域及范围

  疾病标志物筛选、作用机制研究、植物抗逆研究、药物作用靶点研究、特殊功能蛋白质筛选。

  只适用于活体培养的细胞,对于生物医学研究中常用的组织样本,体液样品等无法分析,对于动物模型的标记成本太大,无法实现。

 

  样品要求

 

蛋白质提取物

组织样品

细胞样品

体液样品

浓度≥1μg/μL,蛋白质总量≥300μg

动物、微生物组织湿重≥10mg;植物鲜嫩组织≥100mg

≥107

≥500μL

 

注:蛋白缓冲液中不能含有SDS、NP40、Triton、X-100各类去污剂。

 

  项目周期

 

进展

时间周期

收样/质控

1-2个工作日

样品处理

5-6个工作日

质谱上机

3-4个工作日

数据分析

2-3个工作日

总计

不超过20个工作日

超过4个样品每增加1个增加5个工作日

 

 

 

 

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