蛋白质组学

Amicon&174; Pro蛋白纯化浓缩操作指南

耗时长,产量低,
大家其实都一样
 
蛋白从克隆表达到纯化脱盐浓缩,一路经过千山万水,宝贵的活性蛋白产量是很多人的“命根子”。然鹅,努力的我们还是苦恼的时候多,欣喜的时候太少太少~~

 
 
纯化黑科技,是时候放大招了
 
有没有什么好方法能让操作步骤少一点、再少一点,而同时蛋白的活性及产量损失也少一点、再少一点??
 
让我们看看那些蛋白操作高手的秘密武器吧
——Amicon® Pro

由传统方法升级到革命性的Amicon® Pro纯化超滤系统,纯化、浓缩、换液从此不同。
 
真的能这样操作??
视频:https://v.qq.com/x/page/q0378jlg84p.html
 
让我们一起来欣赏一下Amicon® Pro带来的蛋白纯化浓缩的流畅操作。
  
 
操作1
亲和纯化——多样本操作,更快更好
6次低速离心,总耗时~100分钟
(含65分钟孵育时间)
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1. 在Amicon® Pro上样池中加入200µL亲和纯化树脂(根据融合标签选择,50%悬浊液)
和1.5mL漂洗缓冲液。1,000×g离心1min。
2. 加入0.5mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1h,其间可温和搅动促进结合。
3. 1,000×g离心1min 以去除未结合杂质。
4. 加入1.5mL漂洗缓冲液,1,000×g离心1min。
5. 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5mL超滤管(有5种截留分子量规格可选)。
6. 加入1mL洗脱缓冲液与树脂混匀。孵育5min。
7. 4,000×g离心15min。
8. 加上蛋白样品最终需要的缓冲液1.5mL。4,000×g离心15min,置换缓冲液的同时进行浓缩。
9. 倒转Amicon® Ultra 0.5mL超滤管,1,000×g离心回收纯化和浓缩好的蛋白。
 
操作2
脱盐/缓冲液置换并浓缩——
20倍体积温和换液,效率大大提升
5次低速离心,总耗时~35分钟
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1. 在上样池中加入0.5mL TBS-T预湿Amicon® Pro。1,000×g离心1min。
2. 优化选做:加入1.5mL用于置换的缓冲液,1,000×g离心1min。
3. 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5mL超滤管(有5种截留分子量规格可选)。
4. 加入1.5mL样品,4,000×g离心15min进行浓缩。
5. 加入1.5mL需要置换的缓冲液,4,000×g离心15min,换液的同时进行浓缩。
6. 倒转Amicon® Ultra 0.5mL超滤管,1,000×g离心回收处理好的蛋白。
 
操作
抗体标记——
操作步骤少、时间节省而抗体得率高
5次低速离心,总耗时~50分钟
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1. 在上样池中加入0.5mL TBS-T预湿Amicon® Pro。1,000×g离心1min。
2. 加入抗体样品
• 对于比较稀释的样品(< 1mg/mL)
- 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5mL超滤管(建议使用50kDa)。
- 加上至多1mL抗体样品, 4,000×g离心15min。
• 对于浓度较高的的样品( 1mg/mL)
- 在Amicon® Ultra 0.5mL超滤管(建议使用50kDa)中加入至多100µL样品。
- 将装有样品的Amicon® Ultra 0.5mL超滤管接在Amicon® Pro上样池的下端。
3. Amicon® Pro上样池内加入预先准备好的1.5mL含有染料的反应混合液。
4. 4,000×g离心15min。
5. 优化选做:将样品在室温下多孵育30 min。
6. 上样池中加入1.5mL PBS± NaN3。
7. 4,000×g离心15min换液同时浓缩。
8. 倒转Amicon® Ultra 0.5mL超滤管1,000×g离心回收标记好的抗体。
 

更多关于Amicon® Pro的灵活应用正在各个实验室里被大家创造出来~~
欢迎告诉我们Amicon® Pro是如何帮助您提高蛋白操作效率的……
 
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Amicon® Pro 24/
(不含超滤管)
目录号ACS500024
 
可自行搭配Amicon® Ultra-0.5mL超滤管

  • 3Kda 目录号UFC500396 
  • 10Kda 目录号UFC501096 30Kda 目
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