蛋白质组学

知否知否,因是OpenSPR如何革新流式动力学检测!

流式细胞仪是现代细胞生物学家和免疫学家不可缺少的优秀工具。它可以提供广泛的信息,帮助研究人员识别各种细胞的物理和化学特征。作为一种用途极为广泛的仪器,流式细胞仪有许多应用,包括细胞计数、分选、活力、细胞凋亡检测、膜电位甚至结合检测等。但是其无法直接检测分子间结合动力学,因此本文我们讨论了流式细胞仪的应用并演示如何使用我们的OpenSPR的LSPR技术对流式细胞仪的工作做革新,以更快的获得发表文章所需的动力学数据。

流式细胞仪的工作原理

流式细胞仪是基于光学的仪器,通过流体系统、激光器、一系列光学滤波器和检测器进行运作。将荧光标记的细胞悬浮液注射入仪器,细胞通过一个漏斗型流体瓶颈,将细胞变成单细胞流。然后,细胞通过激光照射的细胞检测区,基于细胞内的物理和/或化学特征,光被散射,细胞上的荧光团也被激发并向探测器发射,从而获取细胞的荧光信号和光散射信号。细胞被激光检测,它们要么直接被废弃,要么被分类并进入收集管进行下游检测。

从流式细胞仪可以得到的信息

流式细胞仪可以进行一系列的定量测量,包括细胞计数、分类、活力测定、凋亡检测、膜电位和表面亲和力检测。重要的是,生物治疗药物已经成为治疗癌症、免疫紊乱疾病等的主要研究领域。值得注意的是,靶向免疫细胞表面受体的候选生物疗法具有独特的结合特性,这是一个非常重要的需要量化的参数。有趣的是,一些非常常见的检测可以用流式细胞仪进行,其可以从生物治疗受体结合反应中确定明显的亲和性。

受体占用率(RO)分析

受体占用实验是一种高通量的方法,通过这种方法可以测量候选治疗(或生物疗法)之间的结合亲和力。值得注意的是,RO分析包括两个重要的“sub-assays”。第一个sub-assays ,荧光标记的非竞争性抗体结合的细胞被注入流式细胞仪并收集数据。随后,将偶联细胞和目标抗体注射到仪器中,生成标准曲线后,可以定量测定表面受体的总表达量。

第二个sub-assays,细胞应与未标记的靶抗体结合,但某些靶抗体应单独标记。注入未标记目标抗体结合的细胞,并记录数据。随后,注射标记的目标抗体,此时,只有自由受体会结合标记的抗体。使用标准曲线,可以确定自由受体的数量。

值得注意的是,将这两种sub-assays结合起来时,就有可能计算出一个称为受体占用率的值。随后,该值可以转化为表面亲和值,如果这个实验长时间进行,则可以计算出间接的动力学值。

OpenSPR如何在动力学检测中革新流式细胞术?

虽然间接测量动力学值是了解生物治疗药物和受体之间发生的结合实验的一个很好的起点,但是直接测量要更全面和准确。在完成流式细胞术的高通量筛选后,我们已经确定了并获得了明显的亲和力。为了使您的研究更接近文章,表面等离子体共振(SPR)将提供一个简单、定量和无需标记的方法,直接测量待测定物和表面受体的kon, koff和KD值。

流式细胞术是在体外用完整的细胞和纯化的抗体进行的,而体外SPR动力学检测建议将纯化或获得纯化的受体固定在传感器芯片上 。当与流式细胞仪结合使用时,SPR是一个突出的补充,使文章数据更强的先进工具 。

市面上一些其他技术也可以提供定量结合数据,包括ITC, MST和BLI以及荧光技术。然而,这些技术通常需要大量的样本,需要标记,不能提供足够的信息和/或需要大量的资本支出。而表面等离子体共振(SPR)几十年来一直是获得定量结合动力学数据的金标准。重要的是,OpenSPR做为“突破零技术门槛”的下一代SPR技术,用户操作友好、低维护且易操作,正在被全球数百名研究人员使用,实现在自己的实验台完成SPR实验,可以轻松获得您需要的高质量数据,从而加快您的研究和发表文章速度。



 

SPR不仅对发表文章是必要的,而且对许多医学领域和医学研究的进展也是必要的,如下文所示,依赖SPR数据的文章呈显著增长趋势 。

OpenSPR分子互作仪对流式动力学检测革新的独特性

• 创新LSPR技术--- 检测不受温度、缓冲液折射率影响

• 易操作---1-2小时快速掌握

• 宽范围检测---pM-nM

• 多参数检测---Ka、Kd、KD、EC50、蛋白浓度测定

• 低成本--- 实时无标记、芯片可再生

• 高性能---大于90Da的分子即可

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