蛋白质组学

OpenSPR 揭开抗抑郁药盐酸舍曲林SERT的神秘面纱!

抑郁症是一种影响3亿以上人群的常见疾病,其最严重的后果是自杀;在全球范围内,每年有近80万人因为抑郁而自杀。这是一个严重的精神疾病,对患病者的社会和职业功能有重大影响。最近的研究表明,炎症和大脑似乎推动了抑郁症的发展;先天的和适应性免疫系统与神经递质和神经回路相互作用,影响抑郁的风险。炎症是一个重要的生物事件,可能会增加患抑郁症的风险发作,类似于传统的心理社会因素。

 

无数临床报告显示促炎细胞因子、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)在抑郁症患者体内显著高于对照组 。核因子-κB(NF-κB)是炎症途径的主要调节因子,调节如肿瘤坏死因子TNF-α、IL-6和IL-1等炎症细胞因子以及抗凋亡和肿瘤 。有证据表明炎症在抑郁症中起着至关重要的作用,因此,新的抗抑郁药的鉴定可能通过其抗炎症作用筛选出来。

舍曲林可改善CUMS小鼠炎症反应并抑制胶质瘤细胞中TNF-α诱导的炎症反应 ,以实现抗抑郁

 

 

盐酸舍曲林(SERT),是广泛使用的抗抑郁药,在临床研究中有抗炎作用,但其作用机制尚不清楚。来自延边大学的研究团队利用OpenSPR 创新LSPR技术快速动力学分析工具及结合Elisa,western 及荧光分析等方法解析了SERT的抗抑郁作用机制。

 

 

实验内容

1)实验小鼠经过一系列的无规律刺激如饥饿,冷热水水浴,夹尾巴及SERT处理等, 之后抽血用Elisa分析SERT对抗炎症因子iNOS, IL-1β, TNF-α的影响;

2)培养的BV2细胞,用SERT、SERT+TNF-α处理24小时及DMSO处理, Western 测定了Iba-1, iNOS, TNF-α, IL-1β, NF-κB p65等因子的表达,并用免疫荧光分析NF-κB p65 ;

结果发现 SERT提高了小鼠的活动,抑制了 Iba-1 的表达及大脑组织和血清中的炎症反应,并抑制 NF-κB 通路, 同时还抑制了TNF-α诱导的NF-κB 活性及BV2的活性。

最后为确定抑制TNF-α诱导的炎症因子是否直接与SERT作用及所需SERT的最佳有效浓度,作者用OpenSPR测定了TNF-α,TNFR1 与SERT之间的相互作用,数据1:1拟合分析获得kD 值分别为9.93uM和4.89uM。

结论

SERT治疗能有效降低轻度压力(cums)下显著提高的外周和中央组织中的主要炎症细胞因子( TNF-α 、IL-1β和iNOS)水平,抑制NF-κB磷酸化和B细胞IκB-α 核因子的磷酸化。此外,SERT降低了血清中转氨酶的水平。

最后通过OpenSPR的LSPR技术快速简单、多参数动力学分析特性,直观确定了SERT直接作用于TNF-α和TNF-α受体1(TNFR1),并可有效阻断TNF-α/TNFR1触发的信号,最终抑制NF-κB信号通路激活小胶质细胞,实现治疗抑郁症的作用;从而清楚的阐述了SERT的抗抑郁作用,同时为抗抑郁剂的研究和开发提供了基础,这些抗抑郁剂可以减少炎症和炎症介质的表达。

OpenSPR 分子相互作用仪在抑郁症药物研发中的独特性

 

• 创新LSPR技术--- 检测不受温度、缓冲液折射率影响;

• 多参数检测---Ka、Kd、KD、EC50、蛋白浓度测定;

• 操作简单---模块化提示,1-2小时即可掌控;

• 高性能---大于90Da的分子;

• 无需专用校正通道---可忽略的bulk效应;

• CO-IP---2-3小时完成实时CO-IP;

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