蛋白质组学

专家点评:如何预防双向凝胶电泳中的水平条纹

专家点评:如何预防双向凝胶电泳中的水平条纹

  在此我们着重讨论了水平条纹的原因和预防。在对任何双向条纹问题进行问题排查时,必须记住两件事:1)水平条纹是由第一向(等电聚焦或IEF)中的不完全聚焦引起的,而2)垂直条纹是由第二向(SDS-PAGE)中蛋白分离 不佳引起的。 第…
蛋白分离的缓冲液系统比较

蛋白分离的缓冲液系统比较

  解离/非解离native缓冲液系统 很多应用蛋白质聚丙烯酰胺 凝胶区带电泳(zone electrophoresis)的研究使用一种缓冲液系统,该系统的设计把所有的蛋白质分解成单一多肽亚单位。最常用的解离试剂是十二烷基硫酸钠(S…
福林-酚法植物体内可溶性蛋白质含量的测定汇总

福林-酚法植物体内可溶性蛋白质含量的测定汇总

  该方法是双缩脲法的发展,包括两步反应: (1)在碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质—铜络合物。 (2)此络合物将试剂磷钼酸—磷钨酸(FolIn试剂)还原,混合物深蓝色(磷钼蓝和磷钨蓝混合物),颜色深浅与蛋白质含量成正比。此方法…
蛋白质组鉴定技术

蛋白质组鉴定技术

  如果目前分离蛋白质组的最好技术是2-DE,那么随之而来的挑战是数百数千个蛋白如何被鉴定. 在这里,我们不考虑传统的蛋白鉴定方法,如免疫 印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析,或者在一个有机体中有意义…
Western转印的优化

Western转印的优化

  从SDS凝胶中进行Western蛋白转印的优化需要对一系列参数进行考虑。目的是转印所有凝胶上的蛋白并将其定量地转移到转印膜上。进行高效转印需要一定程度的优化,尤其是对于大分子量和小分子 量蛋白。 转印后,凝胶上应不残留或残留很少…
表达蛋白的分离与纯化

表达蛋白的分离与纯化

  大肠杆菌 表达蛋白以可溶和不溶两种形式存在,需要不同的纯化策略。现在,许多蛋白质正在被发现而事先并不知道它们的功能,这些自然需要将蛋白质分离出来后,进行进一步的研究来获得。 分析蛋白质的方法学现已极大的简化和改进。必须承认,蛋白…
超滤法分离明胶蛋白水溶液

超滤法分离明胶蛋白水溶液

  一、实验目的 1.熟悉超滤的基本原理、板式超滤器 的结构及基本流程 2.了解超滤过程中的影响因素如温度、压力、流量及物料分子 量等因素对超滤通量的影响 3.了解超滤器污染的原因及其对策 二、实验原理 超滤的技术原理近似机械筛分。…
15种蛋白质单晶培养的方法

15种蛋白质单晶培养的方法

  15种蛋白质单晶培养的方法: (1)大量养晶法(bulk crystallization):若急着养出单晶,则将纯化之蛋白质溶液加入固体盐类或饱和盐液,直到溶液中出现乳白混浊色,离心后把上清液(suppernatant)放置数天…
SPA的提取

SPA的提取

  SPA提取的方法很多,包括煮沸法、溶菌酶法、葡萄球菌溶素法、超生波法以及三氯醋酸法等。现将常用的方法介绍如下: 1.煮沸提取法 ⑴ 将菌株接种于蛋白胨葡萄糖琼脂 培养基上,37℃培养20h~24h。 ⑵ 以0.15mol/L p…