蛋白质组学

western blotting的一些个人经验

western blotting的一些个人经验

  个人经验,仅供参考: 1.用脱脂奶粉封闭的效果不一定比用BSA 差,不过我们试过几种奶粉,有一些奶粉不太适合.推荐使用的奶粉:雀巢高钙奶粉,多力精低脂奶粉.一般国产的奶粉的颗粒比较大,不太容易溶解. 2.关于三名治:本人以前做时…
Pierce推出更快更彻底的新品去垢剂

Pierce推出更快更彻底的新品去垢剂

  Thermo Scientific Pierce近日推出了HiPPR去垢剂去除离心柱/离心板,可更快更彻底地从细胞裂解液及其他生物样品中去除去垢剂。这种即用型的产品适用于低浓度的蛋白及多肽样品。HiPPR树脂结合并去除去垢剂,同…
蛋白质提取与纯化技术

蛋白质提取与纯化技术

  选择材料及预处理   以蛋白质和结构与功能为基础,从分子水平上认识生命现象,已经成为现代生物学发展的主要方向,研究蛋白质,首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识,但基本原理不…
Western Blot免疫印迹实验操作方法

Western Blot免疫印迹实验操作方法

Western免疫印迹(western blot )是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。 一、原理 与Southern或Northe…
可溶性蛋白的纯化(融合T7·Tag的表达蛋白)

可溶性蛋白的纯化(融合T7·Tag的表达蛋白)

蛋白表达技术全攻略 大肠杆菌表达蛋白以可溶和不溶两种形式存在,需要不同的纯化策略。现在,许多蛋白质正在被发现而事先并不知道它们的功能,这些自然需要将蛋白质分离出来后,进行进一步的研究来获得。分析蛋白质的方法学现已极大的简化和改进。必…
凝胶过滤实验中的注意事项

凝胶过滤实验中的注意事项

蛋白纯化技术专题 1.层析柱 的选择 层析柱 大小主要是根据样品量的多少以及对分辨率的要求来进行选择。一般来讲,主要是层析柱的长度对分辨率影响较大,长的层析柱分辨率要比短的高;但层析柱长度不能过长,否则会引起柱子不均一、流速过慢等实…
限制性内切酶分类指南

限制性内切酶分类指南

重组DNA技术工具酶 限制性核酸内切酶产品选择专题 30多年前,当人们在对噬菌体的宿主特异性的限制-修饰现象进行研究时,首次发现了限制性内切酶 。细菌可以抵御新病毒的入侵,而这种"限制"病毒生存的办法则可归功于细…
Folin

Folin

  一、 目的 掌握Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法,熟悉分光光度计 的操作。 二、原理 Folin-酚试剂法包括两步反应:第一步是在碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物;第二步是此络合物将磷钼酸-磷钨酸试剂(F…
融合蛋白表达系统常遇问题

融合蛋白表达系统常遇问题

  研究者们在分离到某一基因后,要对其编码蛋白质进行研究最理所当然的工作就是表达――即:有目的性地合成外源基因产物。在重组DNA 技术的发展早期,人们认为在基因的前面有一个强启动子和一个起始密码子就足以在大肠杆菌中获得很好的表达。随…