蛋白质组学

IPTG 诱导蛋白表达实验

IPTG 诱导蛋白表达实验

E.coli 的乳糖操纵子(元)含Z、Y及A三个结构基因,分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶,此外还有一个操纵序列O、一个启动子序列P及一个调节基因I.I基因编码一种阻遏蛋白,后者与O序列结合,使操纵子(元)受阻遏而处于关闭状态…
酪蛋白的提取

酪蛋白的提取

  一、实验目的 1、掌握一种提取蛋白的方法。 2、掌握一种检测牛乳质量的方法。 二、 实验原理 酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质,约占乳蛋白的80~82%,酪蛋白不是单一的蛋白质,是一类含磷的复合蛋白质混合物,以一磷酸酯键与苏…
western blotting的转膜步骤

western blotting的转膜步骤

  下面的步骤适用于通过XCell Ⅱ转印系统进行蛋白印记的大部分应用。为达到最佳效果,用户的优化是必要的。 I. 所需材料: •Xcell SureLock™或Xcell Ⅱ™ Mini-Cell以及Blot Module(Cat…
NINTA蛋白提纯的原理、步骤与常遇问题分析

NINTA蛋白提纯的原理、步骤与常遇问题分析

  Ni柱中的氯化镍或者硫酸镍可以与有HIs(组蛋白)标签的碱性蛋白蛋白结合,组蛋白标签一般是6个组氨酸(碱性氨基酸)。在蛋白上样后,带有组氨酸标签的蛋白特异性结合到柱子里,其他的杂蛋白流出。Ni-NTA纯化介质是Ni离子金属螯合介…
细胞色素P450的光谱测定

细胞色素P450的光谱测定

细胞色素P450(cytochromeP450或CYP450,简称CYP450)为一类亚铁血红素—硫醇盐蛋白的超家族,它参与内源性物质和包括药物、环境化合物在内的外源性物质的代谢。   细胞中,细胞色素P450主要分布在内质网和线粒…
重组蛋白在E.coli中表达及纯化

重组蛋白在E.coli中表达及纯化

一、实验目的 1. 掌握重组蛋白诱导表达的方法; 2. 亲和层析法纯化His 标记的融合蛋白 二、实验原理 将目的基因连接在表达载体后,通过加入诱导剂IPTG诱导目的基因表达。表达载体除具有蛋白表达所需要的启动子外,在终止子前有6个…
蛋白质盐析分离法

蛋白质盐析分离法

蛋白质的结构与功能作用 蛋白纯化技术专题 一、蛋白质 盐析分离的原理: 蛋白质在稀盐溶液中溶解度会随着盐浓度的增大而上升(盐溶),当盐浓度增大到一定数值时,其溶解度又逐渐下降直至蛋白质析出。盐析的发生是由于盐浓度增大到一定数值时使水…
TNFα生物学活性检测方法

TNFα生物学活性检测方法

基本原理 TNF的生物学活性之一是能直接杀伤肿瘤细胞。TNF与相应受体结合后向细胞内移,被靶细胞溶酶体摄取导致溶酶体稳定性降低,各种酶外泄,引起细胞溶解。肿瘤细胞株对TNF-α的敏感性有很大的差异,用放线菌素D、丝裂酶素C、放线菌酮…
血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定

血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定

I 血液及组织样品的制备 分析组织中某种物质的含量、探索物质代谢的过程和规律,经常使用动物的肝、肾、脑、粘膜和肌肉等组织,也选用全血、血浆、血清或者无蛋白血滤液等血液样品,有时也采用尿液、胃液等完成各种生化实验。掌握以上各种实验样品…
免疫共沉淀和免疫沉淀的图示和实验步骤

免疫共沉淀和免疫沉淀的图示和实验步骤

免疫沉淀(IP)是一种利用的抗原 抗体反应的原则,确定具体反应中混合物的抗体蛋白数量及具体物理特性的方法。而免疫共沉淀(Co-IP) 则作为分析蛋白质间的相互作用而被广泛认知。下面是这两种实验方法的具体操作步骤。 Steps of …