2021年12月 的所有文章

看完这篇文章,不要再傻傻分不清nitrocellulose和PVDF

看完这篇文章,不要再傻傻分不清nitrocellulose和PVDF

在做Western Blot的时候,膜的选择是整个实验的一个关键点,所以大家要谨慎选择。毕竟它是一个物理支撑物,不但要hold住宝贵的样品,还要有“坚韧不拔”的精神来抵抗住各种实验条件。每个研究人员的目标蛋白特点和下游检测方法不尽相…
开启蛋白质印迹法成功大门的第一把钥匙

开启蛋白质印迹法成功大门的第一把钥匙

蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是将电泳分离后的细胞或组织蛋白质从凝胶转移到固相支持物例如硝化纤维(NC)或聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上,然后通…
Western Blot 中你不可不会的剥离技术

Western Blot 中你不可不会的剥离技术

Western Blot的过程复杂繁琐,大家难免会在实验中遇到一些问题。而且整个实验耗时较长,所以我们要尽可能的利用现有的转渍膜和蛋白样品。如此一来,剥离和再探测的技术也就应运而生。   为什么要剥离? 有科学依据的原因:…
单克隆抗体糖基化与糖基化工程抗体 (上)

单克隆抗体糖基化与糖基化工程抗体 (上)

自从人们发现单克隆抗体(MAbs)的应用价值后,它已被广泛的应用于科学研究及临床疾病的治疗中。目前MAbs主要被应用在癌症,自身免疫性疾病,感染性疾病及炎症的治疗。 MAbs的各种作用模式包括对抗原的中和作用,补体依赖的细胞毒作用(…
单克隆抗体糖基化与糖基化工程抗体 (下)

单克隆抗体糖基化与糖基化工程抗体 (下)

重组抗体Fc段聚糖链结构(图中实线为基础糖骨架,虚线为或有或无的糖残基链) 继在上篇中向大家介绍了单克隆抗体的糖基化类型后,本篇中BioEngX将向大家介绍通过对宿主细胞基因的改造获得糖基化工程抗体的一些研究。 1去除岩藻糖(Fuc…
三种常用的蛋白质浓度测定方法

三种常用的蛋白质浓度测定方法

对很多人来说,检测蛋白质的浓度实在不是多困难的实验。但有时我们也不能太过自信,因为即使最简单的方法都有其复杂的机理。为了帮助大家选择正确并且简单的方法测定蛋白质的浓度,小编在这里简单介绍下三种常用的蛋白质含量测定方法的原理及注意事项…
浅谈ELISA的那些事儿

浅谈ELISA的那些事儿

酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,简称ELISA)是一种基于抗原抗体之间专一键结特性的分子实验。结合在固体承载物(通常为塑胶孔盘)上的抗原或抗体仍然保持蛋白质的完整天然结构,利用键…
关于Bradford Assay, 你可能不知道的事

关于Bradford Assay, 你可能不知道的事

Bradford方法是最常用的蛋白质定量方法之一。其原理很简单,棕色染料考马斯亮蓝G250与蛋白质结合形成蓝色复合物,复合物在595 nm处有最大吸光值。吸光值与蛋白质浓度成正比。配置已知浓度梯度的标准蛋白质溶液,制作标准曲线。根据…
Western Blot 常见问题和处理方法

Western Blot 常见问题和处理方法

Western blot 结果中背景较高 (high background): 膜封闭不够/封闭液 (blocking buffer)不适合:延长封闭时间,增加封闭液的浓度;尝试不同种类的封闭液,对比结果后选出效果最佳的。 洗膜不够…
Western Blot 封闭液的选择

Western Blot 封闭液的选择

封闭是Western Blot 至关重要的一部分, 所以正确的封闭液(blocking buffer)选择可以让抗体更好更准确的和抗原结合,为成功的WB奠定基础。虽然这个步骤操作简单,但是封闭液的选择确是很多科研人员的难题。为了让大…